¿Hay alguna razón por la que se diga que la espectroscopia de fluorescencia es más sensible que la Uv-Vis?
Sólo añadiré que la abstracción matemática correcta para la sensibilidad es la relación señal/ruido.
Respuestas
¿Demasiados anuncios?La fluorescencia es un tipo de medición de "fondo cero" o absoluto, lo que significa que se pueden medir fotones individuales contra un fondo "oscuro", por lo que la sensibilidad es enorme y está limitada por la fracción de luz captada y la eficiencia del detector.
La absorción es una medida relativa ya que es la diferencia de dos grandes números, uno la intensidad de la luz sin muestra $I_0$ y el otro cuando la muestra está presente I . En términos de fotones estas intensidades son enormes, digamos $I_0=10^6$ y un cambio del 1% reduciría el número de fotones a $10^6-10^4$ ; sigue siendo un número grande, por lo que la medición de la absorción busca la pequeña diferencia entre dos números grandes. Esta medición está limitada por el ruido de los detectores y otros componentes electrónicos. (Es un poco como intentar pesar al capitán de un barco pesando el barco con él de pie en la cubierta y luego cuando no está).
Miguel
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En la fluorescencia, lo que se detecta son realmente fotones emitidos. La medida se hace en término absoluto (frente a 0 , la oscuridad) y la respuesta puede ser fácilmente amplificada.
Por el contrario, en la absorción es una diferencia que debe medirse. Y esto, por supuesto, puede ser arbitrariamente pequeño.
Es como masificar una muestra. Es más fácil pesar un mg que detectar un mg de diferencia entre dos muestras de "unos 10 kg".
Esta consideración general se ve agravada por otros detalles prácticos, como los enumerados en la respuesta de Dan.
También se aplica tu consideración sobre la geometría, que de nuevo viene dictada por lo anterior.
Editar: Las respuestas de Porfirio aparecieron después de que enviara esto. Si no, no habría respondido ya que esto es básicamente un duplicado.
Gnijuohz
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La absorbencia puede provenir de no-analitos, mientras que la fluorescencia suele ser bastante específica de un analito o de un analito marcado con un fluoróforo. Además, la configuración instrumental puede influir. Las especificaciones de UV-Vis suelen ser horizontales en cuanto a los haces incidentes, la muestra y el detector. Las especificaciones de fluorescencia suelen estar a 90 grados para "extraer" la fluorescencia de la muestra al detector. Si sólo se "extrae" lo que interesa, me imagino que la relación señal/ruido será mejor, lo que dará lugar a una mayor sensibilidad.
