¿Cómo elegir el volumen correcto durante la preparación de una serie de diluciones?

Question

Pregunta Original

Una solución de colorante, Negro Amido 10B tinte ($10~\mathrm{mM}$, $6.165~\mathrm{g\over L}$), como siempre absorbe la luz demasiado fuerte para la medición de un valor de la absorbancia. Por lo tanto, es necesario diluir antes de continuar con un experimento para construir una curva estándar de absorbancia vs concentración o cantidad de colorante. El stock de $10~\mathrm{mM}$ Negro Amido solución debe ser diluido $200\times$ utilizando purificada (RO) de agua. Para lograr la dilución, se recomienda que las diluciones seriadas ser utilizado.

¿Cómo podría diluir el Negro Amido 10B $200\times$ a un volumen total de $3~\mathrm{mL}$? Suponga que usted sólo tiene pipetas que no pueden prescindir de menos de $20~\mu\mathrm L$.

Comentarios

Ya hemos sido a través de esta pregunta juntos en clase, pero a pesar de hacer un montón de preguntas que yo todavía no entendía lo que mi tutor estaba tratando de explicar. Ya tengo las respuestas, pero quiero saber cómo descubrirlo por mí mismo. Mi tutor fue este:

1. La adición de $50~\mu\mathrm L$ de colorante en $50~\mu\mathrm L~\ce{H2O}$ da $1$ $2$ dilución.
2. Tome $30~\mu\mathrm L$ de la nueva solución y agregar $2970~\mu\mathrm L~\ce{H2O}$, dando un mayor $1$ $100$ dilución.

No entiendo de dónde sacó $50~\mu\mathrm L$ de colorante y $50~\mu\mathrm L$ $\ce{H2O}$ si $1\!:\!2$. Yo sé que ella split $1\!:\!200$ a $1\!:\!2$ porque las pipetas no puede prescindir de menos de $20~\mu\mathrm L$. Yo tampoco entiendo de dónde sacó el $30~\mu\mathrm L$ a partir del segundo paso.

Answer 1

A sus preguntas:

No entiendo de dónde sacó $50~\mu\mathrm L$ de colorante y $50~\mu\mathrm L$ $\ce{H2O}$ si $1\!:\!2$.

Es siempre problemática que expresan las diluciones de ratios, porque es ambiguo en cuanto a lo que a los números se refiere. Aquí, el "$1$" se refiere al volumen de la solución diluida, y el "$2$" se refiere al volumen final después de la dilución. Por lo tanto, la $50~\mu\mathrm L$ ("$1\times$") se diluye a $100~\mu\mathrm L$ ("$2\times$"), y con el fin de hacer que usted necesita para agregar $100~\mu\mathrm L-50~\mu\mathrm L=50~\mu\mathrm L$ a de RO $\ce{H2O}$. Esto podría válidamente ser expresado como $1\!:\!1$ dilución; por lo tanto la ambigüedad.

Yo tampoco entiendo de dónde sacó el $30~\mu\mathrm L$ a partir del segundo paso.

Por el mismo $\mathit{Initial~Volume : Final~Volume}$ proporción de la convención, el $1\!:\!100$ dilución a un volumen final de $3~\mathrm{mL}=3000~\mu\mathrm L$ va a requerir de partida con $3000\div 100 = 30~\mu\mathrm L$ de la solución intermedia.

---

De manera más general:

Yo prefiero expresar las diluciones de uso de una "nveces" notación, por ejemplo:

1. Diluir $50~\mu\mathrm L$ de solución de tinte $2$veces con RO $\ce{H2O}$
2. Diluir $30~\mu\mathrm L$ de la solución del paso ($1$) $100$-veces con RO $\ce{H2O}$

A pesar de que todavía hay espacio para la ambigüedad en esta redacción, me diluir $n$veces indica mucho más claramente que el volumen final $V_f$ debe $n\times$ el volumen inicial $V_i$, y por lo tanto que el volumen de diluyente necesario es:

$$V_d = V_f-V_i = nV_i-V_i = V_i\left(n-1\right)$$

Answer 2

Todo el problema está concebido para poner a prueba el conocimiento de las diluciones.

(1) Suponiendo que había un 15 µL de la pipeta y un 3 ml matraz aforado, a continuación, usted acaba de tomar de 15 µL de la solución stock y añadir 3 ml matraz aforado y llenar con agua hasta la marca. Hecho...

(2) La solución con un 50 µL de la pipeta y, a continuación, un 30 µL de la pipeta es una especie de estúpido. Usted no necesita dos diferentes pipeta tamaños. Usted puede mezclar 30 µL de la solución de reserva con 30 µL de agua para obtener una solución con la mitad de la concentración. Teniendo en 30 µL de la 1/2 de la concentración de la solución y diluir a 3ml le dará otros 100 veces la reducción en la concentración. Por lo general los dos pasos podría reducir la concentración a 1/200 de la original.