¿Cómo separan los químicos los nucleótidos individuales de las cadenas de ADN? ¿Cómo añaden esos nucleótidos a, por ejemplo, una reacción de PCR para replicar el ADN?
Lo pregunto porque en mi clase de microbiología, mi profesor no sabía la respuesta exacta.
¿Se escinden los nucleótidos por hidrólisis? ¿Construye de alguna manera los nucleótidos?
Sólo tienes que comprar los nucleósidos trifosfatos a tu proveedor favorito, están disponibles en el mercado.
Que yo sepa los NTP que se pueden comprar se siguen produciendo biológicamente y no se sintetizan (ver este ejemplo de Sigma Aldrich que declara una fuente microbiana). Así que se cultiva una gran cantidad de bacterias, se lisan las células para obtener el contenido y luego se digiere el ADN o el ARN con una enzima apropiada que lo corta en nucleótidos simples. Para obtener el trifosfato, hay que fosforilar de nuevo los monofosfatos con la cinasa adecuada.
Según sigma aldrich, los nucleótidos utilizados para la PCR se producen ahora de forma sintética.
El bajo rendimiento y el alto coste de su producción biológica lo hacen poco práctico. Cuando se producen sintéticamente se obtiene un alto rendimiento a bajo coste.
Se añaden a la mezcla de PCR en una solución preparada previamente y normalmente se transfieren mediante una micropipeta o una máquina.
El nuevo gen puede construirse a partir de estos nucleótidos.
Mediante técnicas de terapia génica, el nuevo ADN puede incorporarse a un genoma.
Una, de las múltiples técnicas, utiliza un vector de adenovirus con el nuevo ADN empaquetado en su interior para transportar e insertar el nuevo ADN en la célula en forma de polímero de ácido nucleico que incorpora los genes a los cromosomas.
Se hicieron experimentos para comparar la eficacia de los genes sintéticos con los biológicos, con la necesidad de nucleótidos biológicos como control. Ahora saben que el gen construido a partir de nucleótidos sintéticos muestra la misma expresión que el gen biológico del mismo código que los nucleótidos sintéticos utilizados. Sin embargo, se pueden seguir utilizando nucleótidos producidos por microbios.
Ref:Wikipedia, Terapia génica. Sigma aldrich - Soporte técnico ph - 1800 800 097
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